1. TEDE
  2. Câmpus Central - Sede: Anápolis - CET - Ciências Exatas e Tecnológicas Henrique Santillo
  3. Programa de Pós-Graduação Stricto sensu em Ciências Moleculares (PPGCM)
  4. Mestrado em Ciências Moleculares
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dc.creatorSantos, Fernando Machado dos-
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/3988323011039907por
dc.contributor.advisor1Duarte, Gabriela Rodrigues Mendes-
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/9005971441891787por
dc.contributor.referee1Bailão, Alexandre Melo-
dc.contributor.referee2Arruda, Andréa Fernandes-
dc.date.accessioned2020-03-31T19:12:20Z-
dc.date.issued2013-11-29-
dc.identifier.citationSANTOS, Fernando Machado dos. Extração e amplificação de DNA de bactérias em Dispositivos microfluídicos descartáveis de poliéstertoner (PT). 2013. 77 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Moleculares) -Câmpus Central - Sede: Anápolis - CET, Universidade Estadual de Goiás, Anápolis.por
dc.identifier.urihttp://www.bdtd.ueg.br/handle/tede/247-
dc.description.resumoA microfluídica possibilita a manipulação de pequenos volumes de fluidos em canais com dimensões micrométricas proporcionando diversas vantagens analíticas e aplicações em diferentes áreas do conhecimento. A evolução das análises envolvendo DNA em microescala busca revolucionar as técnicas analíticas e as manipulações convencionais de laboratório. No presente trabalho, foram construídos dispositivos microfluídicos de poliéster-toner (PT) para realizar a extração dinâmica de DNA em fase sólida (dSPE) com partículas de sílica magnéticas e a amplificação de longos segmentos de DNA através da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) das bactérias Azospirillum brasilense AbV5 e Escherichia coli BL21 transformada com plasmídeo pGEX-4T-3. Por meio da quantificação das frações eluídas na extração da DNA foram elaborados os gráficos do perfil de eluição para avaliação da quantidade de DNA extraído antes e após a agitação das partículas magnéticas de sílica e o cálculo da eficiência de extração. A amplificação de DNA pela PCR foi realizada em sistema homemade por meio de aquecimento mediado por radiação infravermelha (IV) sendo a temperatura controlada por um termopar com o auxílio do software LabVIEW. A extração de DNA realizada em microchips de PT mostrou-se um método rápido, com alta eficiência de extração e pureza, podendo ser amplificado posteriormente pela PCR. Foram obtidos produtos amplificados pela PCR em dispositivos microfluídicos de PT utilizando o par de primer Y1 e Y3 corresponde ao gene 16S rDNA do DNA da bactéria A. brasilense AbV5 e o par de primer blaTEM forward e blaTEM reverse correspondente ao gene codificador de resistência a antibióticos do DNA da bactéria E. coli BL21. Os produtos amplificados foram separados por eletroforese no Bioanalyzer apresentando picos de fluorescência correspondentes a 1500 e 1150 pares de bases para as bactérias A. brasilense AbV5 e E. coli BL21, respectivamente. Os resultados demonstraram pela primeira vez o sucesso do uso de microchips de PT para as análises de DNA de bactérias.por
dc.description.abstractThe microfluidic enables the manipulation of small volumes of fluids in micrometer channels providing several analytical advantages and applications in different areas. The evolution of microscale analysis seeks to revolutionize the analytical techniques and the conventional laboratory manipulations. In this work, polyester-toner (PT) microfluidic devices were constructed to perform dynamic solid phase DNA extraction (dSPE) with magnetic silica beads and amplification by Polymerase Chain Reaction (PCR) from Azospirillum brasilense AbV5 and Escherichia coli BL21 transformed with pGEX-4T-3 plasmid. By the eluted fractions quantification in the DNA extraction were elaborated the graphics of the elution profile for evaluation of the amount of DNA extracted before and after the magnetic silica beads agitation and the calculation of extraction efficiency. The DNA amplification by PCR was performed on a homemade system by heating mediated by infrared radiation (IR) and temperature controlled by a thermocouple with the aid of LabVIEW software. The DNA extraction performed in PT microchips showed to be fast, with high efficient extraction and purity, that can be amplified in downstream PCR amplification. Amplified products were obtained by PCR using the primer pair Y1 and Y3 correspond to the 16S rDNA gene of the DNA of A. brasilense AbV5 bacteria and the primer pair blaTEM forward and blaTEM reverse correspond to the antibiotic resistance encoding gene of the DNA of E. coli BL21 bacteria. The amplified products were separated by electrophoresis on Bioanalyzer showing fluorescence peaks corresponding to 1500 and 1150 base pairs for the A. brasilense AbV5 and E. coli BL21 bacteria, respectively. The results demonstrate for the first time the successful use of PT microchips for DNA analysis from bacteria.por
dc.description.provenanceSubmitted by Sandra Barbosa (sandrabarbosa632@gmail.com) on 2020-03-31T17:08:41Z No. of bitstreams: 2 license.txt: 2145 bytes, checksum: c95cd6f9b71291b5bf5d457abee715a1 (MD5) Fernando_Machado_dos_Santos.pdf: 2004466 bytes, checksum: 4f8171ff5022e8a31d557a8de28f6a2f (MD5)eng
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dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESpor
dc.formatapplication/pdf*
dc.languageporpor
dc.publisherUniversidade Estadual de Goiáspor
dc.publisher.departmentUEG ::Coordenação de Mestrado Ciências Molecularespor
dc.publisher.countryBrasilpor
dc.publisher.initialsUEGpor
dc.publisher.programPrograma de Pós-Graduação Stricto sensu em Ciências Molecularespor
dc.rightsAcesso Abertopor
dc.subjectMicrofluídicapor
dc.subjectAnálise genéticapor
dc.subjectPoliéster-tonerpor
dc.subjectMicrofluidics, andpor
dc.subjectGenetic analysispor
dc.subjectPolyester-tonerpor
dc.subject.cnpqCIENCIAS EXATAS E DA TERRA::QUIMICApor
dc.titleExtração e amplificação de DNA de bactérias em Dispositivos microfluídicos descartáveis de poliéstertoner (PT)por
dc.title.alternativeExtraction and amplification of DNA from bacteria in disposable polyester-toner (PT) microfluidic deviceseng
dc.typeDissertaçãopor
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