@MASTERSTHESIS{ 2013:638725381, title = {Extração e amplificação de DNA de bactérias em Dispositivos microfluídicos descartáveis de poliéstertoner (PT)}, year = {2013}, url = "http://www.bdtd.ueg.br/handle/tede/247", abstract = "A microfluídica possibilita a manipulação de pequenos volumes de fluidos em canais com dimensões micrométricas proporcionando diversas vantagens analíticas e aplicações em diferentes áreas do conhecimento. A evolução das análises envolvendo DNA em microescala busca revolucionar as técnicas analíticas e as manipulações convencionais de laboratório. No presente trabalho, foram construídos dispositivos microfluídicos de poliéster-toner (PT) para realizar a extração dinâmica de DNA em fase sólida (dSPE) com partículas de sílica magnéticas e a amplificação de longos segmentos de DNA através da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) das bactérias Azospirillum brasilense AbV5 e Escherichia coli BL21 transformada com plasmídeo pGEX-4T-3. Por meio da quantificação das frações eluídas na extração da DNA foram elaborados os gráficos do perfil de eluição para avaliação da quantidade de DNA extraído antes e após a agitação das partículas magnéticas de sílica e o cálculo da eficiência de extração. A amplificação de DNA pela PCR foi realizada em sistema homemade por meio de aquecimento mediado por radiação infravermelha (IV) sendo a temperatura controlada por um termopar com o auxílio do software LabVIEW. A extração de DNA realizada em microchips de PT mostrou-se um método rápido, com alta eficiência de extração e pureza, podendo ser amplificado posteriormente pela PCR. Foram obtidos produtos amplificados pela PCR em dispositivos microfluídicos de PT utilizando o par de primer Y1 e Y3 corresponde ao gene 16S rDNA do DNA da bactéria A. brasilense AbV5 e o par de primer blaTEM forward e blaTEM reverse correspondente ao gene codificador de resistência a antibióticos do DNA da bactéria E. coli BL21. Os produtos amplificados foram separados por eletroforese no Bioanalyzer apresentando picos de fluorescência correspondentes a 1500 e 1150 pares de bases para as bactérias A. brasilense AbV5 e E. coli BL21, respectivamente. Os resultados demonstraram pela primeira vez o sucesso do uso de microchips de PT para as análises de DNA de bactérias.", publisher = {Universidade Estadual de Goiás}, scholl = {Programa de Pós-Graduação Stricto sensu em Ciências Moleculares}, note = {UEG ::Coordenação de Mestrado Ciências Moleculares} }